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Métodos de extração de DNA

Extração de DNA é a remoção de ácido desoxirribonucleico (DNA) das células ou vírus. De acordo com a genética Home referência Handbook, ADN é um material hereditário encontrado em quase todas as células de um organismo vivo. Pode ser encontrada no núcleo da célula (chamado de DNA nuclear) e na mitocôndria (chamada de DNA mitocondrial ou mtDNA).

Os fatos

Informação do DNA é armazenada no código que é composto de quatro bases químico: adenina (A), guanina (G), citosina (C) e timina (T). DNA humano é composto por cerca de 3 bilhões de bases, dos quais 99% são os mesmos. O que torna o DNA tão único é a combinação específica ou com estas bases.

Características

As bases do par de DNA acima e formam pares de base. Cada base é anexado a uma molécula de açúcar e uma molécula de fosfato (chamado um nucleotídeo). Nucleotídeos são organizados em duas longas cadeias que formam uma dupla hélice que tem a capacidade de self-replicate. Como resultado, cada nova célula tem a mesma cópia exata do DNA da célula da qual ela dividida.

Usa

Extração de DNA é uma das primeiras etapas em muitos processos de diagnósticos (para doenças e desordens genéticas) usados para bactérias e vírus detecção. Estas técnicas incluem:

* Fluorescente no Hybridization do Situ: para a identificação de grupos bacterianos específicos * polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição de Terminal: para identificar, caracterizar e quantificar espacial e temporal padrões em bacterio-plâncton marinho * seqüenciamento – seqüenciamento de porções ou genomas inteiros para a comparação com seqüências existentes

Função

De acordo com o projeto do genoma humano, organismos de qualquer tipo podem ser identificados pela análise de seqüência de DNA. As identificações individuais dentro de uma espécie são menos precisa, no entanto, e como melhora a tecnologia de DNA, uma comparação directa dos grandes segmentos de DNA e genoma inteira vai se tornar mais viável, permitindo a exata identificação individual. Para identificar um indivíduo, os cientistas digitalizar 13 regiões do DNA, ou loci e criaram um perfil de ADN (ou impressão digital do DNA). Isto é usado porque uma pessoa tem uma possibilidade particularmente pequena que outra pessoa terá o mesmo perfil de ADN para um determinado conjunto de 13 regiões.

Métodos

Existem três técnicas principais para extração de DNA. Estes incluem extração orgânica (às vezes chamado de extração de clorofórmio fenol), extração de Chelex e papel de FTA.

Extração orgânica tem a mais longa história e é frequentemente usada em situações onde o RFLP (uma técnica que quebra o DNA em pedaços) ou PCR (uma técnica que cria milhares de cópias do DNA de uma única peça) digitação é usado. DNA com alto peso molecular, que é essencial para métodos RFLP, é mais eficaz com a extração orgânica.

O método de Chelex é mais rápido que extração orgânica. Envolve também a menor número de passos e como resultado, um menor número de oportunidades de contaminação de amostra para amostra. Chelex, no entanto, produzir DNA de cadeia simples de extração e, por conseguinte, só é útil para testes baseados em PCR.

Papel de FTA é uma abordagem relativamente recente para extração de DNA, e foi desenvolvido na década de 1980 por Lee Burgoyne. Papel de FTA é um papel absorvente e base de celulose que contém quatro substâncias químicas para proteger as moléculas de DNA de degradação de nucleases.

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